PCR Mycobacterium tuberculosis
Utförande laboratorium
Mikrobiologiska laboratoriet, Sunderby sjukhus
Remiss
I Cosmic:
Mikrobiologi - Luftvägar nedre - Sputum | PCR | Mycobacterium tuberculosis.
Beställare utan tillgång till Cosmic kan använda Klinisk Mikrobiologis pappersremiss.
Viktig remissinfo: Kliniska symtom och misstänkt smittland.
Provtagning
Prov från djupa luftvägar tas enligt de rutiner som gäller vid misstänkt tuberkulossmitta. Metoden är validerad för sputumprov, men andra material kan analyseras, tex. bronksekret, bronksköljvätska (BAL), pleuravätska, ventrikelsköljvätska, urin, likvor, abscesspunktat.
Sputumrör med skruvlock eller sterilt rör med skruvkork, minst 2 ml. Provet sätts sedan i transporthylsa, som sedan sätts i provpåse för biologiskt prov UN3373. Märk provpåsen med ”TB-PROV TILL SYS”.
Se till att korkar är ordentligt tillslutna och att inget spill finns på provkärlens utsida.
Det krävs alltid 2 sputumprover tagna vid samma tillfälle. Det ena analyseras med PCR vid Klinisk mikrobiologi i Sunderbyn, det andra ska skickas till Tuberkuloslaboratorium för Tuberkulos och andra mykobakterier (odling/direktmikroskopi/DNA-påvisning).
OBS: Vid utredning av misstänkt lungtuberkulos rekommenderas provtagning vid minst 3 olika tillfällen. Provet ska tas på morgonen före frukost då morgonsputa antas vara mest bakterierik. Det är viktigt att instruera patienten att hosta upp kraftigt så att prov kommer från nedre luftvägarna. Upphostning spottas direkt i sputumröret. Tillblandning av material från övre luftvägarna kan minskas om patienten före provtagningen sköljer munnen med vatten (eventuell tandprotes tas ut före munsköljning).
Provtagningsmaterial
Provhantering
Kylförvaring. Provet skall transporteras snarast till laboratoriet då tid till analys påverkar prestandan.
Svarsrutiner
Svar kan erhållas dagtid vardagar.
Referensintervall/Beslutsgräns
Mycobacterium tuberculosis-komplexet DNA: PÅVISAD/Ej påvisad
Rifampicin resistensmutation: PÅVISAD/Ej påvisad
Indikation
Misstanke om akut M. tuberculosis-infektion, där misstanke om smittsamhet är hög, och där ett skyndsamt svar är viktigt för hantering av patient. Analys utförs inte vid utredning av latent infektion.
Se även provtagningsanvisningar Tuberkuloslaboratorium för Tuberkulos och andra mykobakterier (odling/direktmikroskopi/DNA-påvisning) som ska ske parallellt.
PCR ersätter inte traditionell TB-diagnostik med odling och direktmikroskopi, utan är endast ett komplement för att ge snabbare svar, fra. gällande patienter som läggs in på sjukhus och utreds pga. misstänkt lungtuberkulos.
Medicinsk bakgrund/Tolkning
Tuberkulos PCR (Xpert MTB/RIF Ultra) detekterar M. tuberculosis-komplexet (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. canetti, M. microti, M. caprrae, M. mungi och M. orygis) och resistensmutationer för rifampicin.
PCR kan användas som screeningtest för att bekräfta misstanke om 2 aktiv tuberkulos och för att utesluta högsmittsam TB, vilket medför att behandling kan sättas in tidigare eller att isolering kan undvikas. Analysen används i 130 länder, är rekommenderad av WHO och bör användas framför allt när patienten kan producera sputum då andra provmaterial har lägre känslighet.
Parallellt med PCR ska alltid separata prov skickas för odling och direktmikroskopi till Tuberkuloslaboratorium, eftersom odling har högre känslighet och möjliggör resistensbestämning. Mykobakterieodling detekterar 1-100 CFU/ml medan PCR-baserade metoder detekterar 15-1000 CFU/ml och direktmikroskopi omkring 10 000 CFU/ml.
Interferens och felkällor
OBS! Falskt positiva genotypiska rifampicin-resistensmutations-resultat förekommer, därför viktigt med den fenotypiska resistensbestämning från Tuberkuloslaboratorium.
Faktorer som kan påverka analysens sensitivitet; andra provtagningsmaterial än sputum, mindre mängd provmaterial än 2ml, lång förvaringstid innan analys (>3 dagar), större partiklar i provet, icke optimalt taget sputumprov
Analysen kan inte användas som indikation på terapeutisk framgång/svikt, pga. risk för kvarstående Tb-DNA, mykobakterie-DNA kan ofta detekteras månader efter effektiv behandling, på grund av kvarvarande DNA från döda bakterier.
Metod
RealtidsPCR
Ackrediterad
Ja